托里消毒散对内皮祖细胞外泌体中表达与炎症相关miRNAs的影响
目的:探讨托里消毒散浸提液促进内皮祖细胞(EPCs)增殖的最佳质量浓度,进一步分析托里消毒散浸提液对EPCs分泌外泌体(EPC-Exos)及外泌体中与炎症相关微小RNA(miRNAs)表达的影响。方法:无菌条件下取足月健康新生儿脐带血,分离得到单个核细胞,进一步分离并鉴定得到EPCs,将鉴定成功的EPCs用不同质量浓度梯度(0.00、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00、4.00、8.00、16.00、32.00、48.00、64.00、100.00及128.00 mg/mL)的托里消毒散浸提液干预24 h,筛选出促进EPCs增殖的最佳质量浓度。另将鉴定成功的EPCs分为托里消毒散浸提液组(实验组)和磷酸盐缓冲液(PBS)组(对照组),实验组用最佳质量浓度的托里消毒散浸提液干预,对照组用等体积的PBS液处理,培养24 h,分别收集两组细胞外泌体。Western blotting法检测两组外泌体的生物学标记物(CD81、CD63、CD9、Calnexin);采用透射电子显微镜观察外泌体的形态;利用纳米粒子追踪分析技术检测外泌体的粒径;BCA检测两组外泌体质量浓度;qPCR法检测各组外泌体中与炎症相关miRNAs分子的表达。结果:托里消毒散浸提液促进EPCs增殖的最佳质量浓度为0.50 mg/mL;各组外泌体的生物学标记物(CD81、CD63、CD9)的表达均呈阳性,Calnexin的表达呈阴性。两组外泌体均形态完整、呈球形、大小均一,对照组中97.3%的EPC-Exos粒径为41.1~109.0 nm;实验组中99.5%的EPC-Exos粒径为120.3~284.5 nm。对照组与实验组EPC-Exos总蛋白质量浓度分别为(1.16±0.01)μg/μL和(1.04±0.02)μg/μL,差异均有统计学意义(P0.01)。实验组中部分与炎症相关miRNAs表达较对照组增多,即miR-92a-3p和miR-92a-5p表达增多,miR-92a-3p差异无统计学意义(P0.05),miR-92a-5p差异有统计学意义(P0.05),而miR-30d-3p、miR-30d-5p、miR-144-3p和miR-144-5p的表达较对照组明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:托里消毒散浸提液在促进内皮祖细胞增殖的同时能促进其分泌外泌体,且所分泌的外泌体负载调控炎症反应的miRNAs。托里消毒散浸提液能介导EPC-Exos发挥炎症调控的作用。
中医药导报
2025年05期
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